在大腸桿菌細胞中復制的質粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序，這與細菌DNA中的頻率相似。CpG免疫刺激的兩個應用領域是疫苗接種和腫瘤免疫***。許多出版物表明，免疫刺激CpG基序可以用于疫苗接種策略，包括給藥編碼抗原的pDNA載體或給藥抗原本身。通過不同的給藥途徑給藥含CpG的脂叢可以抑制**生長。這些結果來源于使用表達促炎細胞因子(如IL-12)的轉基因或甚至不含外源轉基因的載體的研究。**的生長抑制似乎是由CpG基序引起的，因為這些序列的甲基化否定了這種作用。雖然有***效果，但含CpG基序對**生長的抑制的確切性質尚不清楚。產生的細胞因子對腫瘤細胞和**脈管系統(tǒng)都有多重作用。一個恰當的例子是IL-12的能力，在響應含CpG基序時產生，引發(fā)抗血管生成反應。其他細胞因子，如IFN-g(自身為CpG誘導的細胞因子)誘導的細胞因子，即IP10和Mig，也能夠具有抗血管生成特性?；瘜W轉染可分為基于脂質體或非基于脂質體。小動物轉染試劑難轉染

質子泵抑制劑可以通過基于從一個供體蛋白到受體蛋白的能量轉移的物理測量來評估，也可以通過化學測量來評估，在化學測量中，表達的蛋白質與另一種蛋白質之間的相互作用活性可以在刺激時通過適當的報告系統(tǒng)來檢測。后一種基于熒光素酶的方法被稱為生物發(fā)光共振能量轉移(BRET)，它是熒光共振能量轉移研究質子泵抑制劑的替代方法。多個質粒的共轉染也可以應用于轉染，其中包括將編碼Cas9蛋白和引導RNA的質粒遞送到宿主細胞，使用CRISPR/Cas9基因組工程系統(tǒng)進行基因組編輯。除了使用多個質粒外，雙鏈載體是另一種將不同基因傳遞到宿主細胞的方法。雙鏈載體是一種能夠表達兩種不同基因的載體，通過一個內部核糖體進入位點連接，只有一個啟動子。杭州轉染試劑代做研究人員集中研究了將合成t細胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。

轉染時通常推薦使用血清減少或無血清培養(yǎng)基，包括陽離子轉染試劑，如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。這種轉染活動需要形成陽離子脂質體-DNA復合物，這需要帶正電的脂質體分子和帶負電的核酸之間的相互作用。因此，血清中負電荷分子的存在可能會影響這種復雜的相互作用，從而影響轉染效率。然而，發(fā)現(xiàn)10%血清的存在導致FuGENE HD、jetPEI、Lipofectamine 2000和Arrest-In轉染MCF-7、HeLa、C2C12和MC3T3的轉染效率更高。研究表明，轉染中少量的血清可以通過調節(jié)轉染復合物的zeta電位來改善轉染復合物與其宿主細胞表面之間的表面相互作用。

網格蛋白介導的內吞途徑呼吸道合胞病毒（RSV）是導致嬰幼兒***的主要病毒病原體。研究表明，網格蛋白介導型內吞途徑是目前研究得較為透徹且經典的病毒入胞途徑。其中網格蛋白在此途徑中的地位很重要。通過針對網格蛋白重鏈的小干擾RNA（siRNA）抑制網格蛋白的表達，可以有效的抑制RSV***Hela細胞。這提示網格蛋白介導的內吞途徑在病毒感染細胞過程中發(fā)揮重要作用，同時也暗示了在某些情況下，RNA轉染試劑可能利用這一途徑進入細胞21。二、小窩蛋白介導的內吞途徑在研究非病毒載體用于小干擾RNA（siRNA）遞送時發(fā)現(xiàn)，將用組氨酸和半胱氨酸修飾的HIV-1Tat肽（mTat）與聚乙烯亞胺（PEI）結合，并與陽離子兩親脂質基試劑INTERFERin（INT）組合成的雜合載體（mTat/PEI/INT）能高效遞送siRNA。研究表明，F(xiàn)ilipinIII和β-環(huán)糊精（小窩蛋白介導的內吞作用抑制劑）能***抑制mTat/PEI/INT/siRNA轉染，而氯丙嗪（網格蛋白介導的內吞作用抑制劑）則不能抑制mTat/PEI/INT/siRNA轉染。此外，mTat/PEI/INT在4°C時的轉染效率明顯低于37°C。這些結果表明，mTat/PEI/INT作為一種潛在的有吸引力的非病毒載體用于siRNA遞送，其轉染過程可能是通過小窩蛋白介導且依賴溫度的內吞途徑實現(xiàn)的。在腺病毒載體或脂質體的全身遞送后，轉基因表達相對短暫。

超聲輔助轉染涉及在宿主細胞膜上制造微小的孔，以促進核酸(包括DNA和RNA)的傳遞。與前一種策略類似，超聲照射的暴露時間、脈沖數和密度也被報道與轉染效率成比例相關，直至達到閾值。超過耐受極限，細胞存活率和轉染效率可能會下降。同樣，增加核酸的數量也可以提高超聲輔助轉染的轉染效率。在同一項研究中，超聲轉染懸浮培養(yǎng)的人293T細胞比轉染貼壁培養(yǎng)的相同細胞類型更容易。然而，這一觀察結果與另一項研究的結果不一致，該研究報告在懸浮或單層條件下培養(yǎng)的轉染大鼠細胞數量沒有***差異。值得注意的是，后一項研究還報道了單層培養(yǎng)的大鼠細胞在轉染后保持較高的細胞活力。然而，這兩項研究的不一致結果表明，超聲穿孔的比較好培養(yǎng)條件可能因使用的細胞系不同而異。在另一項研究中表明超聲轉染效率因使用的細胞類型而異，Hela和T-24細胞系的超聲轉染效率優(yōu)于PC-3、U937和Meth A細胞系。因此，細胞類型的選擇是影響超聲轉染效率的另一個因素。轉染試劑的凍融被認為是另一個可能影響轉染效率的潛在因素。湖北轉染試劑疫苗

PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當鏈長超過20個殘基時，它與質粒DNA結合并凝聚成致密顆粒。小動物轉染試劑難轉染

由于CRISPR/Cas的發(fā)現(xiàn)，基因組編輯領域經歷了一場**。細菌免疫系統(tǒng)的CRIPSR/Cas成分導致全基因組雙鏈DNA斷裂，并通過內部DNA修復過程促進基因編輯。有研究指出，陽離子聚合物聚乙二胺-環(huán)糊精(PC)有助于編碼Cas9和sgRNA的質粒的有效遞送。當大質粒通過PC傳遞時，它們可以以高N/P比聚結并包裹質粒;這有效地編輯了兩個基因組位點:血紅蛋白亞基β(19.1%)和菱形5同源物1(RHBDF1(7.0%))。研究人員開發(fā)了巨噬細胞特異性啟動子驅動的Cas9表達質粒(pM458和pM330)，并將其包裹在陽離子脂質輔助PEG-b-PLGA納米顆粒中，以解決無法在靶組織和細胞中進行精確基因編輯的問題(CLAN)。基于陽離子聚合物的基因***在臨床試驗中顯示出巨大的潛力，但由于研究仍處于早期階段，目前大多數研究都處于臨床前階段。小動物轉染試劑難轉染