PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當鏈長超過20個殘基時，它可以與質粒DNA結合并凝聚成致密顆粒。研究人員發(fā)現(xiàn)，配體在PLL上的共價附著可通過受體介導的途徑***增強內吞作用。例如，涎腺樣體(ASOR)是涎腺糖蛋白受體的配體，在肝細胞上表達。當ASOR共價附著在PLL上時，受體介導的內吞作用和質粒的細胞攝取***增加。此外，與葉酸或轉鐵蛋白相關的PLL已被開發(fā)出來，并在將pDNAs轉染到*細胞中取得了實質性進展。另一種重要的聚氨基酸是PLO(聚L-鳥氨酸)。PLO具有PLL的特性，但轉染效率比PLL提高了10倍。Ramsay和Gumbleton證明，與PLL相比，PLO以更低的電荷(+/?)比率凝聚pDNA，并且在相同的多陽離子/pDNA質量比下，PLO/pDNA復合物比PLL/pDNA復合物更耐破壞。然而，由于其介導內體逃逸的能力較差，帶正電的多氨基酸的轉染效率仍然很低。與DNA轉染類似，RNA可以通過基于RNA的病毒或非病毒載體導入真核細胞。陜西青島轉染試劑

核酸與轉染試劑的比例對轉染效率也有影響。在一項涉及原代人成肌細胞的研究中，使用不同的核酸比例來比較轉染效率的影響，轉染試劑包括FuGENE6、Effectene和ExGen500(一種基于pei的試劑)。該研究的一個***發(fā)現(xiàn)是，轉染效率可能不一定與所用試劑的體積直接相關。例如，2μgDNA與5μLFuGENE6試劑的比例被證明可以產生比較好的轉染效率，而更低或更高的DNA與試劑的比例并不能提高效率。在另一項涉及轉染人胃腺*細胞系的研究中也觀察到類似的發(fā)現(xiàn)，即在一系列組合中使用比較高轉染試劑與DNA比體積測試時，轉染效率并未達到比較好。使用不成比例的高轉染試劑量會導致不必要的細胞毒性，從而降低整體轉染結果。因此，確定合適的核酸與試劑比例是啟動新的轉染研究以實現(xiàn)高轉染效率和低細胞毒性的重要步驟。DNA轉染試劑便宜研究人員集中研究了將合成t細胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。

流式細胞術可以更精確地定量表達特定熒光基因的細胞，以評估轉染效率。另一種評估轉染效率的方法是通過監(jiān)測轉染后的特定蛋白表達。將轉基因引入細胞可能會改變由轉基因或細胞中其他基因編碼的蛋白質的表達。同樣，轉染小RNA也可以調節(jié)宿主細胞中特定下游遺傳靶點的表達。免疫印跡和免疫熒光染色可用于評估轉染后蛋白表達的變化。在這兩種方法中，使用特異性抗體結合靶蛋白是至關重要的，后者需要使用與一抗結合的熒光標記二級抗體來檢測感興趣的蛋白質。另一方面，在免疫印跡中，可以使用辣根過氧化物酶(HRP)偶聯(lián)的二抗與一抗結合，進行特異性蛋白檢測。免疫印跡法允許對蛋白質表達進行半定量，而免疫熒光染色法允許通過熒光顯微鏡或流式細胞術進行定量檢測。通過檢查特定蛋白表達來評估轉染效率更具可重復性和直接性。然而，使用抗體所固有的非特異性蛋白質結合問題和獲得假陰性結果的可能性，這可能是由于不及時測定蛋白質表達引起的，仍然是使用這些方法的缺點。

選擇合適的轉染試劑陽離子脂質體：如LipofectamineTM2000等陽離子脂質體是常用的轉染試劑。通過優(yōu)化轉染條件，如轉染前細胞融合度、質粒質量與脂質體體積比及轉染時間等，可以提高轉染效率。例如，在脂質體介導RNA干擾質粒轉染雞成骨細胞的試驗中，當轉染前細胞融合達到90％以上，質粒DNA與脂質體比例為1:2.5時轉染效率比較高，并且在轉染后48h轉染效果比較好，對細胞的毒性作用較小4。二、利用天然陽離子肽混合物——魚精蛋白作為穩(wěn)定劑和增強劑：魚精蛋白不僅可以作為肝素的中和藥物和緩釋胰島素配方中的化合物，還可以用于核酸的細胞遞送。自***作為轉染增強劑使用以來，魚精蛋白已被***用作RNA遞送的穩(wěn)定劑。它能保護RNA免受生物系統(tǒng)內的降解，并增強其對細胞的穿透能力。例如，魚精蛋白穩(wěn)定的RNA遞送系統(tǒng)可以根據(jù)***目標進行調整，如與靶向抗體融合實現(xiàn)精確遞送、消化成細胞穿透肽提高轉染效率或與功能性聚合物非共價混合等。陽離子 RNA 轉染試劑在結合 RNA 分子機制上存在多種差異。

網(wǎng)格蛋白介導的內吞途徑呼吸道合胞病毒（RSV）是導致嬰幼兒***的主要病毒病原體。研究表明，網(wǎng)格蛋白介導型內吞途徑是目前研究得較為透徹且經(jīng)典的病毒入胞途徑。其中網(wǎng)格蛋白在此途徑中的地位很重要。通過針對網(wǎng)格蛋白重鏈的小干擾RNA（siRNA）抑制網(wǎng)格蛋白的表達，可以有效的抑制RSV***Hela細胞。這提示網(wǎng)格蛋白介導的內吞途徑在病毒感染細胞過程中發(fā)揮重要作用，同時也暗示了在某些情況下，RNA轉染試劑可能利用這一途徑進入細胞21。二、小窩蛋白介導的內吞途徑在研究非病毒載體用于小干擾RNA（siRNA）遞送時發(fā)現(xiàn)，將用組氨酸和半胱氨酸修飾的HIV-1Tat肽（mTat）與聚乙烯亞胺（PEI）結合，并與陽離子兩親脂質基試劑INTERFERin（INT）組合成的雜合載體（mTat/PEI/INT）能高效遞送siRNA。研究表明，F(xiàn)ilipinIII和β-環(huán)糊精（小窩蛋白介導的內吞作用抑制劑）能***抑制mTat/PEI/INT/siRNA轉染，而氯丙嗪（網(wǎng)格蛋白介導的內吞作用抑制劑）則不能抑制mTat/PEI/INT/siRNA轉染。此外，mTat/PEI/INT在4°C時的轉染效率明顯低于37°C。這些結果表明，mTat/PEI/INT作為一種潛在的有吸引力的非病毒載體用于siRNA遞送，其轉染過程可能是通過小窩蛋白介導且依賴溫度的內吞途徑實現(xiàn)的。人類原代干細胞是另一種公認的難以轉染的細胞類型，轉染這種細胞類型的挑戰(zhàn)仍然是效率低和細胞活力低。甘肅高分子轉染試劑

不同種類的納米顆粒轉染細胞系后，產生不同的效率、毒性和組織特異性。陜西青島轉染試劑

誘導交替剪接和恢復功能蛋白：某些轉染試劑在將RNA導入細胞后，可誘導特定的生物學效應。例如，2'-OMeUtaPS介導的轉染，在HeLapLuc705細胞中，轉染的反義PMO序列誘導了編碼螢光素酶的前mRNA的外顯子23的交替剪接，恢復功能性螢光素酶的生產，而不會損害細胞毒性5。在肌營養(yǎng)不良癥mdx小鼠模型的肌管肌肉細胞中，靶向聚A尾PMO序列針對編碼肌營養(yǎng)不良蛋白的前mRNA的剪接位點，觸發(fā)交替剪接事件，導致突變外顯子（外顯子23）從pre-mRNA中切除并產生功能性肌營養(yǎng)不良蛋白2。提高轉染效率和減少細胞死亡：為了優(yōu)化并促進將病毒RNA導入哺乳動物細胞，研究人員比較了不同的市售RNA轉染試劑將黃熱病病毒（YFV）和丙型肝炎病毒（HCV）RNA復制子遞送至Huh7細胞的能力，并與電穿孔進行比較。結果發(fā)現(xiàn)，如果適當優(yōu)化，某些試劑將優(yōu)于電穿孔，細胞死亡少得多，RNA需求少，轉染效率提高3。陜西青島轉染試劑