在轉染中，DNA通常通過病毒或非病毒載體(如質粒)轉運到宿主細胞中。質粒的基本結構包括啟動子、復制起點、多個克隆位點、目標基因和選擇標記。質粒復制需要復制的起源，而多個克隆位點包含獨特的內切酶切割位點，用于插入外源基因。適當?shù)恼婧藛幼?如CMV或EF-1a)的存在允許外源基因在宿主細胞中表達。質粒DNA可以以線性和超螺旋DNA的形式轉染。與線性DNA相比，使用超螺旋質粒DNA轉染通常會產生更高的效率，線性DNA更容易被外切酶降解。然而，線性化的DNA更具重組性，因此可以更容易地整合到宿主基因組中以實現(xiàn)穩(wěn)定的轉染。與DNA轉染類似，RNA可以通過基于RNA的病毒或非病毒載體導入真核細胞。干細胞轉染試劑公司

PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當鏈長超過20個殘基時，它可以與質粒DNA結合并凝聚成致密顆粒。研究人員發(fā)現(xiàn)，配體在PLL上的共價附著可通過受體介導的途徑***增強內吞作用。例如，涎腺樣體(ASOR)是涎腺糖蛋白受體的配體，在肝細胞上表達。當ASOR共價附著在PLL上時，受體介導的內吞作用和質粒的細胞攝取***增加。此外，與葉酸或轉鐵蛋白相關的PLL已被開發(fā)出來，并在將pDNAs轉染到*細胞中取得了實質性進展。另一種重要的聚氨基酸是PLO(聚L-鳥氨酸)。PLO具有PLL的特性，但轉染效率比PLL提高了10倍。Ramsay和Gumbleton證明，與PLL相比，PLO以更低的電荷(+/?)比率凝聚pDNA，并且在相同的多陽離子/pDNA質量比下，PLO/pDNA復合物比PLL/pDNA復合物更耐破壞。然而，由于其介導內體逃逸的能力較差，帶正電的多氨基酸的轉染效率仍然很低。干細胞轉染試劑公司化學轉染可分為基于脂質體或非基于脂質體。

脂質復合物又稱陽離子脂質-核酸復合物(CLNACs)，是由非離子核酸與陽離子脂質體（CLs）表面結合，**終形成多層脂質-核酸復合物而形成的。帶負電荷的核酸被吸引到帶正電荷的囊泡表面，**初與?？吭陉栯x子囊泡表面的核酸分子形成復合物，然后發(fā)展到核酸分子持續(xù)粘在脂質分子上的階段，脂質雙分子層圍繞緊實的核脂質顆粒。復合物形態(tài)的這種異質性可能歸因于囊泡的脂質組成、復合物形成的方式、脂質:核酸比例、核酸結構的大小、試劑的批次差異以及用于處理和可視化這些復合物的技術。除了靜電吸引外，疏水相互作用被認為有助于脂質和核酸之間的復合物形成。因此，根據(jù)正電荷(陽離子脂質)與負電荷(核酸上的磷酸基)的電荷比，脂質體可能通過與細胞表面的蛋白聚糖基團等帶電殘基的靜電相互作用，或通過與質膜疏水區(qū)域的疏水相互作用進入細胞。

超聲輔助轉染涉及在宿主細胞膜上制造微小的孔，以促進核酸(包括DNA和RNA)的傳遞。與前一種策略類似，超聲照射的暴露時間、脈沖數(shù)和密度也被報道與轉染效率成比例相關，直至達到閾值。超過耐受極限，細胞存活率和轉染效率可能會下降。同樣，增加核酸的數(shù)量也可以提高超聲輔助轉染的轉染效率。在同一項研究中，超聲轉染懸浮培養(yǎng)的人293T細胞比轉染貼壁培養(yǎng)的相同細胞類型更容易。然而，這一觀察結果與另一項研究的結果不一致，該研究報告在懸浮或單層條件下培養(yǎng)的轉染大鼠細胞數(shù)量沒有***差異。值得注意的是，后一項研究還報道了單層培養(yǎng)的大鼠細胞在轉染后保持較高的細胞活力。然而，這兩項研究的不一致結果表明，超聲穿孔的比較好培養(yǎng)條件可能因使用的細胞系不同而異。在另一項研究中表明超聲轉染效率因使用的細胞類型而異，Hela和T-24細胞系的超聲轉染效率優(yōu)于PC-3、U937和Meth A細胞系。因此，細胞類型的選擇是影響超聲轉染效率的另一個因素。deae-葡聚糖是一種化學修飾的葡聚糖類似物。

基因和RNAi***在臨床上的應用需要安全高效的載體。迄今為止，核酸***的兩種主要方法是基于病毒和非病毒載體。與病毒載體相關的安全問題有很多:誘導免疫反應的風險、不必要的突變和**。因此，在開發(fā)基于脂質或聚合載體的非病毒載體是勢在必行的。1965年，Vaheri和Pagano引入了二乙基氨基乙基修飾的葡聚糖，這是第一種用于基因傳遞的聚合物。1987年，F(xiàn)elgner引入了DOTMA，這是第一種用于DNA轉染的陽離子脂質。從那時起，大量不同的脂質和聚合物被開發(fā)出來。南京星葉生物正是利用將核酸封裝在納米級脂質體囊泡中的技術，開發(fā)出了Gemate系列轉染試劑。小RNA和質粒DNA的共轉染可用于評估轉染效率。浙江南京轉染試劑

提高 RNA 轉染效率的策略。干細胞轉染試劑公司

陽離子脂質體合成中常用的分子是中性脂質二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。DOPE的作用是促進膜融合，并有助于質膜或核內體的不穩(wěn)定。此外，由于陽離子脂質相互排斥，因此需要DOPE等輔助脂質來穩(wěn)定陽離子脂質體（CLs）懸浮液，并抵消其他載體如聚乙烯亞胺(PEI)和樹狀大分子中存在的陰離子糖胺聚糖的抗轉染作用。沒有中性脂質的脂質體具有較低的轉染率，盡管情況并非總是如此。不同的轉染率可能是由用于配制脂質體的陽離子:中性脂質的不同比例引起的。如上所述，CLs介導的核酸轉移的成功取決于許多因素，這些因素可能解釋了脂質體(脂質體介導的轉染)的內在變異性，特別是在體內。干細胞轉染試劑公司